免疫沉澱Immunoprecipitation — 新品FLAG®(DYKDDDDK ) tag-Traps報到!
免疫沉澱Immunoprecipitation —
新品FLAG®(DYKDDDDK ) tag-Traps 報到!
傳統法的免疫沉澱(IP)實驗從細胞裂解開始往往需要幾天的時間才能完成,尤其在過程中還要多方測試抗體要下的濃度,與抗體與Protein A/G bead 的比例。
Chromotek 是間以奈米羊駝重組抗體為技術核心的德國生技公司,奈米羊駝重組抗體有著高度專一性與高度親和力等優勢,藉由將最先進的的奈米羊駝重組抗體與Agarose /beads 架接形成Chromotek 的Nano-Traps (奈米捕捉器),30 mins基本可以捕獲所有目標蛋白,並且60 mins就可以完成一個IP實驗!
除此之外,ChromoTek 的 Nano-Traps 系列產品,還針對蛋白質及其相互作用因子於IP實驗的效果進行了提升。Nano-Traps 主要由與beads結合的奈米抗體 /VHH所組成。Nano-Traps根據不同的需求也有不同的種類供選擇,例如:DYKDDDDK Fab-Trap、GFP-Trap®、RFP-Trap® 和 Spot-Trap®,此外,我們也提供了不同類型的beads讓大家做選擇:
- Agarose beads
- Magnetic Agarose beads
- Magnetic Particles M-270
千呼萬喚始出來~大家期待已久的DYKDDDDK Fab-Trap (Flag-Trap) 終於上市啦!!
DYKDDDDK Fab-Trap承襲了Nano-Trap系列的優點,為您帶來高專一性,低背景的結果,並使用來自M2 clone的重組Fab片段。由於其較小的尺寸,Fab 片段最大程度地減少了與宿主細胞蛋白質體之間不必要的相互作用,從而實現了具有卓越純度和更低背景的高效免疫沉澱。
話不多說,下面讓大家看看實際的實驗結果,相信一定讓你對它的專一性很有感!
▲DYKDDDDK Fab-Trap™ 用於免疫沉澱 HEK293T 細胞裂解液中 Flag® 標記的蛋白。在使用 3xDYKDDDDK-peptide (fp-1) 進行elution期間,大量的 Flag® fusion protein從 DYKDDDDK Fab-Trap™ 中被分離出來。I: Input, FT: Flow-Through, E: Elution。
WB數據中使用DYKDDDDK tag Polyclonal antibody (Proteintech,20543-1-AP)作為一抗,Nano-Secondary® alpaca anti-human IgG/anti-rabbit IgG, recombinant VHH, Alexa Fluor® 488 [ CTK0101、CTK0102] (srbAF488-1)作為二抗。
※ IP分析結果顯示Flag® fusion protein呈現出專一性高且低背景的Single band。
▲在沒有Flag® fusion protein的情況下,分析內源性蛋白與 DYKDDDDK Fab-Trap™ 之間的非特異性結合。 將來自HEK 細胞 (HEK293T)、酵母(釀酒酵母)、昆蟲細胞(HighFive)、細菌(大腸桿菌TG1)和植物(Arabidopsis thaliana)中不含 Flag® fusion protein的裂解液,用 DYKDDDDK Fab-Trap™ 進行免疫沉澱,並用 2x SDS 樣品緩衝液進行elution。 I: Input, FT: Flow-Through, E: Elution。
※ SDS-PAGE 分析結果顯示只有Fab 片段的elution而沒有內源性蛋白質的汙染。
接下來就讓我們帶您了解更多Nano-Trap的特色:
Nano-Trap優點:
- Beads已預先和抗體偶聯,為ready to use 之產品
- 沒有重鏈和輕鏈的干擾
- 在嚴苛的緩衝液中穩定性極佳,背景值非常低
- 解離常數為1 pM,超強結合力
- 讓您省時省力60 mins完成免疫沉澱(IP)實驗
- 業界最高標竿:功能和結構皆經驗證
- 廣受國家級實驗室青睞,2000多篇以上高點數期刊引用
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