細胞增殖(Cell proliferation)多向檢測，尋找做細胞增殖的你！
細胞增殖(Cell proliferation)多向檢測，
尋找做細胞增殖的你！
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當我們做細胞實驗，包括：藥物篩選、病毒轉染、疾病模型、細胞毒性實驗，細胞增殖的定性和定量，成為細胞學研究不二之選。
當我們需要對增殖細胞進行準確定量，那麼CCK8將會在電子耦合試劑存在的情況下，為粒線體內的活性脫氫酶驗明正身；
當需要觀察增殖細胞型態並定量，EdU會代替胸腺嘧啶(T)合成DNA，並暴露在免疫螢光、流式細胞術檢測下，從而進入我們的視野。
當然，對於研究細胞增殖，還有眾多的實驗方法共同上陣，現在就讓我們來對它們進行一個詳細的比較吧！
| 類型 | 方法 | 優點 | 缺點 |
| 直接計數法 | 利用計數版或計數儀得出細胞的數目。 | 簡單，省錢，試劑和儀器普通，結果準確。 | 不適合樣品數量多的情況，不適合評估特定的細胞亞群。 |
| 3H-TdR摻入法 | 同位素3H標記的TdR作為DNA合成的前驅物摻入DNA合成過程，從而被液體閃爍計數器檢測到。 | 3H-TdR摻入法敏感性高，重複性好。 | 樣品需經過變性或酵素處理。變性條件可能破壞細胞、組織形態；實驗步驟繁瑣；有一定細胞毒性，不適合長期活體研究。 |
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Brdu檢測法 |
BrdU代替胸腺嘧啶(T)合成DNA，並用螢光標記。 | 經抗原抗體反應可放大信號，可結合其他標記進行同步研究。 | 樣品需經過變性或酵素處理。變性條件可能破壞細胞、組織形態；實驗步驟繁瑣；有一定細胞毒性，不適合長期活體研究。 |
| EdU 檢測法 | EdU代替胸腺嘧啶(T)合成DNA，並用螢光標記。 | 利用Click反應可以快速進行檢測，不依賴於抗體，不需變性DNA，同樣適合多重標記分析，步驟簡單。 | 具有較強的細胞毒性，不適合長期活體研究。 |
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MTT 檢測法 |
活性脫氫酶將黃色的MTT分解成藍紫色的不溶性甲䐶，並沉積在活細胞中，死細胞無此功能。DMSO能溶解細胞中的甲䐶，在490nm波長處測定其吸光值。 |
價格便宜，使用廣泛。 |
受藥物本身的顏色、培養基的顏色、血清的濃度使結果的變異較大。 |
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CCK-8檢測法 |
MTT的升級版，細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。 | 由於CCK-8生成的formazan是水溶性的，不需要吸出培養液加入有機溶劑溶解這個步驟，因此可以減少一定的誤差。重複性優於MTT；對細胞毒性小；為1瓶即用型溶液。 | CCK-8價格相對於MTT，較昂貴。 |
| CFSE檢測法 | 一種可穿透細胞膜的螢光染料，可利用不可逆方式與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上，是一種良好的細胞標記。 | 螢光信號強，細胞毒性低。通常用於長時程追蹤細胞的增殖狀況，並且兼容活體動物實驗。 | 最終的數據獲取，需要借助流式細胞儀。而資料分析，也需要使用帶有增殖分析功能的特殊軟體來拉曲線。 |
| 核抗原Ki-67染色法 | Ki-67染色，研究人員可以評估處於細胞週期所有活躍期的總增殖細胞的百分比。 | 類似石蠟切片、冷凍切片等已經失去活性的樣本，就只能利用免疫染色的方法來觀察活躍增殖分子標記。 | 只能對固定細胞、組織進行觀察。 |
細胞增殖會產生諸多重要改變，包括 DNA 的合成、細胞代謝增加、增殖特異性蛋白的表達等。
基於新一代 AbFluor ™ 螢光染色技術，Abbkine 開發出能直接從 DNA level精準檢測細胞增殖狀態的EdU kit (Cat No. KTA2030 和 KTA2031)；同時，還開發出通過細胞代謝實現高通量檢測細胞增殖狀態的CCK8 kit (Cat No. KTA1020 和 BMU106-EN)。
▲Fig.1 HEK293 and L929 cells in the positive control group were induced by cytotoxicity inducer for 30 min, while the control group was not given any treatment. Enhanced Cell Counting Kit-8 (CCK-8) was used to detect the cytotoxicity of HEK293 and L929 cells after cytotoxicity induction.
▲Fig.2 Cell Proliferation EdU Image Kit (Green Fluorescence) was used to detect the cytotoxicity of HEK293 cells after cytotoxicity induction.
上述兩大類方法，均是在活細胞、活組織中進行的。但如果面對的是類似石蠟切片、冰凍切片等已經失去活性的樣本，就只能利用免疫染色的方法來觀察活躍增殖分子標記了。
目前最受歡迎和認可的增殖標記是Ki-67（Cat No. ABM40064）（全名MKI67，marker of proliferation Ki-67），這個分子標記同時也是多種癌症病理診斷指標之一，下圖為人類子宮癌組織的Ki-67免疫組織化學染色。在細胞質、細胞核和細胞膜上均有表達。
此外，PCNA（proliferating cell nuclear antigen, Cat No. ABL1040）也是常用的活躍增殖標記。它在細胞核中表達穩定，也常常作為WB實驗中細胞核的Internal control。
值得一提的是，CFSE染料（5(6)-CFDA, SE, Cat No. BMD0066）也是檢測細胞增殖的良好標記，它進入細胞後，可利用不可逆地方式與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上。當細胞分裂時，CFSE標記螢光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其螢光強度是親代細胞的一半。在一個增殖的細胞群中，各連續代細胞的螢光強度成對遞減，利用流式細胞儀在488nm激發光和螢光檢測可對其進行分析。
產品推薦
| Product Name | Application | Cat No. | Size |
| SuperKine™ Maximum Sensitivity Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | Cell Proliferation/Toxicity | BMU106-EN | 200T/1000T/10000T |
| Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | Cell Proliferation/Toxicity | KTA1020 | 1000/10000T |
| LDH Cytotoxicity Assay Kit | Cell Toxicity | KTA1030 | 96/480T |
| Cell Proliferation EdU Image Kit (Green Fluorescence) | Cell Proliferation | KTA2030 | 100/500T |
| Cell Proliferation EdU Image Kit (Orange Fluorescence) | Cell Proliferation | KTA2031 | 100/500T |
| Anti-PCNA Mouse Monoclonal Antibody (1D7) | IF, IHC-P, WB | ABL1040 | 50 μL/200 μL/200 μLx5 |
| Ki 67 Monoclonal Antibody | IF, IHC-P | ABM40064 | 30 μL/100 μL/200 μL |
| 5(6)-CFDA, SE | Cell Tracing/Viability Detection | BMD0066 | 5 mg/50mg |
