【Proteintech】次世代流式抗體 FcZero-rAb™ 重磅上線！
【Proteintech】次世代流式抗體 FcZero-rAb™ 重磅上線！
在流式實驗中，除了配色和對照之外，我們還會經常遇到另一個棘手問題，那便是Fc效應
——許多細胞表面表達的Fc受體，能夠識別並結合抗體的Fc端，導致抗體被標記到非目標細胞上，造成了結果的不準確和不真實。
以兔抗為例，兔IgG 作為我們最常用的抗體類型之一，其 Fc段 與 人類IgG1 的 Fc段 胺基酸序列同源性很高，尤其 FcγR 結合區域：
圖1 兔IgG 與 人類IgG1 Fc段 胺基酸序列比對
兔IgG 很容易與 人類FcγR 產生結合，我們透過親和力測定實驗（BLI法）發現，野生型兔IgG （Rabbit IgG-WT ）與人類Fc受體所有亞型均有高度結合性，二者間的親和力基本和 人類IgG 與 人類Fc受體一致：
圖2 野生型兔IgG與人類FcγR親和力測定
因此我們在實驗時，通常需要額外增加一個步驟：使用 Fc受體封閉試劑 來消除 Fc效應（Fc block）。
這項操作不僅增加了實驗難度和成本，而且Fc受體封閉試劑的封閉效果也是參差不齊；例如最近購買的一個Fc受體封閉試劑，有一定封閉效果，但效果不盡人意：
圖3 Fc受體封閉試劑效果測試
有沒有可能，找到一個從根源解決 Fc效應 的好方法？
次世代流式抗體 FcZero-rAb™ 新型骨架重組抗體 正式上線！
針對上述研究痛點和困難，Proteintech 的研發團隊基於 "ABCE™單一B細胞抗體發現平台" 和 "FcZero™沉默技術平台" 開發了一系列的 次世代流式抗體 FcZero-rAb™ 新型骨架重組抗體，該系列創新產品採用了全新的抗體骨架，從根源上消除了由Fc受體結合引起的非特異性背景訊號。
圖4 FcZero-rAb™抗體的Fc沉默原理
相較於傳統骨架流式抗體的先天不足，FcZero-rAb™新型骨架流式抗體突破了行業壁壘，具有FcZero™沉默技術平台帶來的多重技術革新優勢：
① 完全消除Fc效應
② 定點定量標記
③ 僅需一種同型對照
④ 高穩定性
1. FcZero-rAb™抗體完全消除Fc效應
FcZero-rAb™新型骨架流式抗體的核心在於FcZero™沉默技術，Proteintech透過此技術在Rabbit IgG的Fc CH2區域進行關鍵胺基酸位點突變，屏蔽了抗體與Fc受體的結合，形成Fc silencing（Fc效應沉默）。
此技術完全消除了兔IgG的Fc段與人類Fc受體的結合，包括FcγRI (CD64)、FcγRII (CD32) 和FcγRIII (CD16)等 多種Fc受體。
圖5 FcZero-rAb™IgG與人類FcγR親和力測定
透過FcZero-rAb™新型骨架流式抗體分析人類PBMCs樣本，我們可以看到，與傳統流式抗體或傳統流式抗體+Fc受體封閉劑相比， FcZero-rAb™新型流式抗體背景更乾淨，分組更清晰。
圖6 FcZero-rAb™抗體Fc沉默效果對比
2. FcZero-rAb™抗體定點定量標記 - AccuBright™ Site-specific Conjugation
FcZero-rAb™新型骨架流式抗體採用了生物定點標記技術，每一個抗體分子Fc段都有兩個明確標記位點，可以定點定量標記所需偶聯物。
與市面上常用的化學隨機標記相比，生物定點標記技術不僅能夠保證偶聯物遠離抗體活性中心，僅在Fc末端而不影響抗體的抗原識別與結合能力，同時還能確保信號強度的均一性和批次間標記情況的重複性。
圖7 生物定點標記與化學隨機標記效果對比
3. FcZero-rAb™抗體僅需一種 Isotype control (同型對照)
傳統流式抗體即使來自同一個物種，也可能有多個抗體亞型，例如小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgGM（下圖右）；
而 FcZero-rAb™ 全系列採用了同一種新型抗體骨架，僅需一種同型對照即可，不僅能夠降低實驗難度，還能有效節省成本。
圖8 FcZero-rAb™抗體僅需一種同型對照
4. FcZero-rAb™抗體可長期穩定保存
針對FcZero-rAb™新型骨架流式抗體的全新骨架，經 SEC-HPLC純度分析、親和力測定 及 流式實驗檢測，FcZero-rAb™新型骨架流式抗體在4℃保存1年之後，成分依舊單一穩定，具有高生物活性。
圖9 FcZero-rAb™抗體熱加速試驗SEC-HPLC純度分析
圖10 FcZero-rAb™抗體熱加速試驗親和力檢測
圖11 FcZero-rAb™抗體熱加速試驗流式檢測
資料來源：Proteintech
相關資訊：
Proteintech 官網連結：FcZero-rAb for Flow Cytometry
Proteintech 官網連結：Uni-rAb™ Recombinant Monoclonal Antibodies
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