【Proteintech】TSA 酪胺信號放大術 — 實現多重染色與超高靈敏度的終極解方

【Proteintech】IHC 實驗變革：TSA 酪胺信號放大術

實現 "多重染色" 與 "超高靈敏度" 的終極解方！

在進行免疫組織化學 (IHC) 或免疫螢光 (IF) 實驗時，您是否曾因目標蛋白豐度過低而導致訊號微弱？
或者為了在同一張組織切片上標記多種蛋白，而在抗體種屬選擇上傷透腦筋？

如果這是您的實驗日常，那麼 TSA (Tyramide Signal Amplification，酪胺信號放大技術) 將是您突破瓶頸的關鍵鑰匙！

一、IHC/IF 實驗的基礎困境與技術瓶頸

免疫組織化學 (IHC) 或免疫螢光 (IF) 是研究蛋白質空間分佈的基石。
然而，標準的 IHC 流程在面對現代複雜研究時，常遇到難以克服的兩大瓶頸：

1. 低表達蛋白的「訊號盲點」：
   傳統二抗系統訊號不足，無法清晰捕捉低豐度（Low Abundance）的轉錄因子或信號分子。
2. 多重染色的「種屬限制」：
   要在同一張切片上標記多個目標，必須嚴格挑選來自不同動物宿主的一抗，極大地限制了抗體選擇的自由度。

IHC 的基礎：成功的預處理是關鍵

無論使用哪種檢測方法，IHC/IF 實驗的起點都在於精確的組織處理。成功的染色取決於能否有效地完成以下步驟：

• 樣本準備： 組織固定、脫水和包埋（如 FFPE 石蠟包埋）。
• 抗原修復 (Antigen Retrieval)： 這是最關鍵的一步。固定劑（如福馬林）會使蛋白交聯，遮蔽抗原位點。
  必須透過 HIER 或 PIER 步驟來解開這些遮蔽，讓抗體能夠結合。

要在 HIER 步驟中獲得最佳效果，高效的緩衝液至關重要，配方有很多種，可以從文獻資料中找尋推薦！

如果不知道該選什麼才適合，推薦 Proteintech 推出的 Tris-EDTA Antigen Retrieval Buffer 給需要的您~

二、TSA 變革解方：解鎖組織成像的「超能力」

TSA (Tyramide Signal Amplification) 技術，是唯一能同時解決上述低訊號和多重染色限制的終極方案。
它將檢測靈敏度提升 10 到 100 倍，並賦予實驗前所未有的自由度。

1. TSA 原理：從單一結合到指數放大

TSA 的核心機制基於酵素 HRP 的高效催化作用：

1. HRP 催化： 一抗與 HRP-二抗結合後，HRP 鎖定目標區域。
2. 自由基生成： 在 H₂O₂ 存在下，HRP 將螢光酪胺分子轉化為高活性的氧化酪胺自由基。
3. 共價沉積： 自由基會迅速與目標區域的蛋白質（酪氨酸殘基）形成穩定的共價鍵，將數百倍的螢光團「沉積」在抗原周圍。

2. TSA 的變革性應用：多重染色循環

傳統 IHC 限制您只能使用不同種屬的一抗。但由於 TSA 訊號是共價固定在組織上的，這讓 HIER 步驟獲得了新的用途，
而也正是 Tris-EDTA Buffer (PR30002) 導入的 HIER 步驟，結合共價鍵結的穩定性，才能實現「剝離與再標記」的複雜循環：

• 剝離 (Stripping)： 每輪 TSA 染色後，使用 HIER 步驟 不僅能確保抗原修復，更重要的是能徹底剝離前一輪使用的一抗和二抗。
• 連續標記： 訊號保留，抗體去除。研究人員得以重複使用相同宿主（如全數使用 Rabbit 或 Rabbit/Mouse 混合）的一抗，
  實現 4 色、5 色甚至更多色的連續標記。

3. Proteintech 的放大媒介：Multi-rAb™ Polymer HRP重組二抗

TSA 的高靈敏度仰賴高效的 HRP 遞送。
Proteintech 的 TSA 解決方案使用了獨特的 Multi-rAb™ Polymer HRP Recombinant Secondary Antibodies。

• 聚合物 (Polymer) 結構： 聚合物載體上結合了多個 HRP 分子，能將數倍於傳統二抗的 HRP 酵素帶到靶點，大幅提升催化效率。
• 重組抗體 (Recombinant) 技術： 確保批次間高度穩定和低背景。

Proteintech 針對不同實驗需求，提供以下 HRP 二抗選擇（均包含在對應的 TSA Kits 中）：

 實驗流程示意動畫 

Increased Sensitivity, Ideal for Low Abundance Targets Detection of IL-17RA Polyclonal Antibody (32055-1-AP) in A431 Cells
With Multi-rAb CoraLite Plus 594 Recombinant Secondary (RGAR004)	With Multi-rAb Polymer-HRP Recombinant Secondary (RGAR011) and CoraLite® Plus 594 Tyramide Reagent (PR30024)

三、Proteintech CoraLite® Plus TSA 終極方案

Proteintech 的 CoraLite® Plus-Tyramide 試劑結合了高效能的 TSA 技術與新一代 CoraLite® Plus 螢光染料，具有超高光穩定性和精確的光譜特性。

1. CoraLite® Plus TSA 多色檢測套組 (一站式 5-Plex 方案)

這些 Kits 內含所有實現多重染色所需的試劑：
多色 TSA 染料、高效能的 Multi-rAb™ Universal HRP Secondary Antibody、DAPI 及緩衝液。

2. CoraLite® Plus TSA 單色試劑 (靈活搭配與替換)

針對需要自定義螢光通道或補色需求的實驗室，我們提供具備優異光譜特性的單色試劑：

Achieve High-Quality Multiplexed-Data
FFPE-rat brain tissue was stained with Lamin B1 monoclonal antibody (Cat.NO. 66095-1-Ig) at 1:2000 followed by detection with Multi-rAb® Polymer HRP-Goat Anti-Rabbit/Mouse Universal Recombinant Secondary Antibody (H+L). CoraLite®Plus 555-Tyramide Reagent was used for signal development (yellow). HIER was then performed in pH 9.0 Tris-EDTA buffer followed by staining with GFAP monoclonal antibody (60190-1-Ig, 1:20000). CoraLite®Plus 488-Tyramide Reagent were used for signal development (green). Similarly, IBA1 recombinant antibody (81728-1-RR, 1:2000) TDP-43 recombinant antibody (80002-1-RR, 1:3200) were stained subsequently. CoraLite®Plus 594-Tyramide Reagent (red) and CoraLite®Plus 647-Tyramide Reagent (purple) were used for signal development, respectively. Finally, cell nucleus (blue) were stained with DAPI.​​	FFPE-human tonsillitis tissue was stained with CD23 monoclonal antibody (60208-2-Ig) at 1:8000 followed by detection with Multi-rAb® Polymer HRP-Goat Anti-Rabbit/Mouse Universal Recombinant Secondary Antibody (H+L). CoraLite®Plus 555-Tyramide Reagent was used for signal development (yellow). HIER was then performed in pH 9.0 Tris-EDTA buffer followed by staining with CD3 monoclonal antibody (60181-1-Ig, 1:10000). CoraLite®Plus 488-Tyramide Reagent were used for signal development (green). Similarly, CD8a monoclonal antibody (66868-1-Ig, 1:20000) and CD138 monoclonal antibody (67155-1-Ig, 1:10000) were stained subsequently. CoraLite®Plus 594-Tyramide Reagent (red) and CoraLite®Plus 647-Tyramide Reagent (purple) were used for signal development respectively. Finally, cell nucleus (blue) were stained with DAPI.​

 立即聯繫：將 TSA 變革引入您的實驗室

TSA 技術的成功，始於精準的抗原修復，成於高效的信號放大。

Proteintech 為您提供實現 IHC/IF 實驗「超能力」的黃金組合：

1. 關鍵準備： Tris-EDTA Antigen Retrieval Buffer (PR30002) 確保抗原修復和剝離步驟的徹底性。
2. 核心放大： Multi-rAb™ HRP 重組聚合物二抗 (HRP-10024 等) 將數倍的 HRP 酵素高效遞送至靶點。
3. 終極顯色： CoraLite® Plus TSA Kits 提供高穩定性、高亮度的螢光團，實現 5-Plex 多重染色的終極目標。

選擇這一完整、高靈敏度的解決方案，從此告別低豐度蛋白的困擾和多重染色種屬的限制。

點擊下方連結，獲取 Proteintech 關鍵試劑詳情：

1. 關鍵緩衝液： Tris-EDTA Antigen Retrieval Buffer (50X) (PR30002)
2. 核心二抗： Multi-rAb™ HRP 兔鼠通用重組二抗 (RGAU011)
3. TSA 試劑總覽： Proteintech TSA Reagents 總覽頁面
4. 多色套組： 通用型 5 色 TSA Kit (PK10034)
    
5. IHCeasy Kits：完整的 IHC Workflow試劑盒，配有預先優化的一抗，可直接應用於組織切片，從而節省時間和寶貴的樣本。
6. IHC Prep & Detect Kits
7. IHC Detect Kits
8. IHC Supporting Products
9. Proteintech 官網連結：Immunohistochemistry Overview

這期倍思特小編分享的內容是不是覺得收穫滿滿呢~

感謝大家的關注和支持

下期見~

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