ChromoTek — 免疫螢光之訊號放大Nano-Booster
產品DM｜GFP-Booster & RFP-Booster
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免疫螢光之訊號放大Nano-Booster
在上一篇我們介紹了 奈米螢光二抗- 高解析度成像的次世代二級奈米抗體，今天的ChromoTek系列文章，小編要介紹一個特殊的探針工具！這類的Nanobodies（奈米抗體）被開發成奈米探針，ChromoTek將之稱為的Nano-Boosters和Nano-Label 奈米探針 (圖一)。它是由標靶蛋白的羊駝單域抗體VHH與螢光染劑(Alexa Fluor)共價偶聯在一起。
奈米探針的功能是可以精確的與GFP、Histone、RFP、Spot和Vimentin 結合後利用奈米抗體上所攜帶的染劑做訊號放大，是理想的超高分辨率成像工具。
產品應用:
- 免疫螢光(IF)
- 免疫細胞染色 (ICC)
- 免疫組織化學染色(IHC)
- 組織透明三維成像 (DISCO)的層光顯微鏡成像 (light-sheet microscopy imaging)
- 超高分辨率顯微鏡（SRM）
奈米探針產品特色:
- 奈米抗體高解析度成像: 增強螢光信號，成像效果更出眾
- 奈米抗體極佳的組織穿透力
- 小於2nm 的抗體結構 >> 螢光基團位移偏差小，定位更精確
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(圖一) Nano-Boosters和Nano-Label 奈米探針示意圖
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(圖二) 奈米探針功能示意圖
下面呈現幾個data 說明一下ChromoTek的Nano-Boosters和Nano-Label 到底怎麼幫助您的實驗，下圖四是利用螢光的方式來看神經元組織的分佈狀況，經實驗測試如果是用傳統的 anti-GFP 抗體，會因傳統抗體的體積過大而無法穿透過組織，使得GFP成像效果不佳 (圖三) ，反之使用 GFP-Booster 因為奈米抗體體積較小螢光染色會較均勻且訊號更強。
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(圖三) 轉基因鼠的組織表達了Cx3Cr1-EGFP
(圖上) EGFP以傳統抗體anti-GFP antibody Alexa 647方式增強EGFP訊號。
(圖下) EGFP以奈米抗體 GFP-Booster Atto647N (產品編號: gba647n ) 式增強EGFP訊號。
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(圖四) whole-body neuronal connectivity map of an adult mouse
紅色:肌肉組織
白色:骨頭和器官
綠色:神經元
漂白效應:
另外; 常常在做螢光成像的會發現一個現象，即是剛開始螢光相當明亮，但隨著時間遞增螢光訊號則逐漸遞減 (圖五)，這是所謂的光漂白效應。
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(圖五)螢光激發後36秒造成的光漂白現象 (圖片取自Thermo官網)
當您要為暗淡或低表現量的目標蛋白嘗試進行定量分析時，褪色可能是個問題。如果要執行任何類型的圖像定量，請務必考慮由於光漂白引起的任何螢光損失，因為它會使得定量數據失準並給您帶來錯誤的結果。
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(圖六)
左:mRFP在螢光激發3秒後即快速衰退,使用RFP-Booster_Atto 594 加強訊號後能延緩螢光衰退.
中:使用GFP GFP-Booster_Atto488 後螢光大幅增強.
右:圖片為果蠅幼蟲中央神經系統使用GFP-Booster_ATTO488來增強多巴胺神經元GFP的訊號.
最後我們展示一張我們使用GFP-Booster Alexa Fluor 488 （貨號：gb2AF488）和RFP-Booster Alexa Fluor 568 （貨號：rb2AF568）進行訊號放大的結果
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HeLa cells were transiently transfected with Tom70-eGFP and PCNA-mRFP.
綠色：GFP-Booster Alexa Fluor 488 （貨號：gb2AF488）
紅色：RFP-Booster Alexa Fluor 568 （貨號：rb2AF568）
Images were recorded at the Core Facility Bioimaging at the Biomedical Center, LMU Munich.
產品一覽
| 產品名稱 | 產品編號 | 應用 |
| GFP-Booster Alexa Fluor®488 | gb2AF488 | IF, SRM |
| GFP-Booster Alexa Fluor®568 | gb2AF568 | IF, SRM |
| GFP-Booster Alexa Fluor®647 | gb2AF647 | IF, SRM |
| GFP-Booster_ATTO488 | gba488 | IF, SRM |
| GFP-Booster_ATTO594 | gba594 | IF, SRM |
| GFP-Booster_ATTO647N | gba647n | IF, SRM |
| Histone-Label_Atto488 | tba488 | IF, SRM |
| RFP-Booster Alexa Fluor®568 | rb2AF568 | IF, SRM |
| RFP-Booster Alexa Fluor®647 | rb2AF647 | IF, SRM |
| RFP-Booster_ATTO594 | rba594 | IF, SRM |
| RFP-Booster_ATTO647N | rba647n | IF, SRM |
| Spot-Label ATTO488 | eba488 | IF, SRM, WB |
| Spot-Label ATTO594 | eba594 | IF, SRM, WB |
| Vimentin-Label_Atto488 | vba488 | IF, SRM |
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常見問題
1. 哪些 Nano-Booster 和 Nano-Label 產品被推薦用於超解析度顯微鏡 ?
Nano-Booster 和 Nano-Label 相關產品都非常適合用於超解析度顯微鏡。由於相比於 15 nm線性尺寸的傳統抗體，這系列的產品體積很小，只有 2-3 nm，可以最大限度地減少交聯誤差以及提供更精確和緻密的染色。Nano-Booster 和 Nano-Label 相關產品具體螢光標記物的選擇取決於使用的顯微鏡設置和鐳射。我們推薦 :
- STED: ATTO647N, Abberior STAR 635P
- STORM: Alexa Fluor 647, ATTO488
- SIM: ATTO488/594
2. Nano-Labels 相關產品是否適用於活細胞染色成像 ?
Nano-Labels 相關產品是小蛋白質分子，因此它們不能穿透非通透性的細胞膜。如果需要將 Nano-Labels 相關產品導入活細胞， 可能需要應用蛋白質轉導方法 ( 如電穿孔法 ) 或試劑，但根據我們的經驗，最有效的方法是顯微注射法。例如 Histone-Label
和 Vimentin-Label 產品進行活細胞染色。
已使用Nano-Boosters和Nano-Label 的文獻資料庫 .png)
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